实验原理
ABO血型系统的鉴定基于红细胞膜上的抗原(A或B)与血清中相应抗体(抗A或抗B)的免疫反应。A型血的红细胞含A抗原,血清中含抗B抗体。通过标准抗A和抗B血清与受试者红细胞反应,结合反向定型(血清与已知A/B抗原的红细胞反应),可确定血型。
实验方法
1. 玻片法(常规方法)
步骤:
1. 标记玻片:用记号笔在玻片两侧分别标注“A”和“B”。
2. 滴加标准血清:在A侧滴加抗A血清(蓝色),B侧滴加抗B血清(黄色)。
3. 制备红细胞悬液:消毒指尖采血,取1滴血与生理盐水混合,制成约5%的红细胞悬液。
4. 混合反应:用牙签将红细胞悬液分别与抗A、抗B血清混合,避免交叉污染。
5. 观察结果:静置10-15分钟,肉眼或显微镜下观察凝集现象。
判断标准:
2. 试管法(更准确)
步骤:
1. 标记试管:取2支试管,分别标记“A”和“B”。
2. 加入试剂:A管加抗A血清,B管加抗B血清,各加1滴受试者红细胞悬液。
3. 离心观察:1000 rpm离心1分钟,轻弹管底观察凝集块是否散开。
4. 反向定型:另取试管,用受试者血清与标准A、B型红细胞反应,离心后观察凝集。
判断标准:
结果判断关键点
1. 凝集现象:
2. A型血判定条件:
3. 排除干扰因素:
注意事项
1. 试剂与样本:标准血清需新鲜,红细胞悬液浓度需严格控制在5%左右。
2. 操作规范:避免血清交叉污染,使用不同滴管操作。
3. 特殊人群:新生儿、老年人或免疫抑制患者可能抗原/抗体效价低,需结合试管法或分子检测(如流式细胞术)。
实验拓展
通过以上方法,可准确判定A型血及其他ABO血型,确保输血安全及临床应用。